摘要：在大花蕙蘭組培快繁過程中，植物激素對(duì)原球莖的誘導(dǎo)、增殖及幼苗的分化有顯著影響。細(xì)胞分裂素6-BA和生長素N從最佳配比對(duì)大花蕙蘭組織培養(yǎng)很重要，尤其是細(xì)胞分裂素影響較大。
關(guān)鍵詞：大花蕙蘭；組織培養(yǎng)；植物激素
大花蕙蘭(Cymbidium)是蘭科蘭屬中一部分大花附生種及其雜交種的統(tǒng)稱，屬復(fù)莖地生蘭或半附生蘭，原產(chǎn)地在喜馬拉雅山脈及東南亞高山上，是世界五大重要商品蘭花之一，近幾年在我國花卉市場上流行的高檔室內(nèi)盆栽花卉，具有極高的觀賞價(jià)值，株型高大雄偉，花大而多，色彩鮮艷。由于大花蕙蘭多為雜交種，種子繁殖無法保持其品質(zhì)特性，其結(jié)實(shí)率也相當(dāng)?shù)停种昴芰θ酰蚨敝诚禂?shù)低，繁殖速度慢，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足商品化生產(chǎn)的需求，而采用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行原球莖增殖可以達(dá)到工廠化生產(chǎn)目的。試驗(yàn)研究植物激素對(duì)大花蕙蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的影響，并成功地建立了快繁體系，可以用于工廠化育苗。
1材料與方法
1．1材料
大花蕙蘭采自河南農(nóng)業(yè)大學(xué)蘭花園中FN4品種，切取健康飽滿10～15 cm長的芽，剝?nèi)ネ獠咳~片直到5 mm大小，消毒處理后作為外植體誘導(dǎo)材料。
1．2 植物激素對(duì)原球莖誘導(dǎo)的影響
以MS為基本培養(yǎng)基，6-BA設(shè)0．5、1.0、1．5、2．0 mg／L(單位下同)4個(gè)濃度水平，NAA濃度為0．2 mg／L，培養(yǎng)基均附加香蕉汁100 g／L，活性炭0．5 g／L，每處理接10瓶，每瓶接1個(gè)莖尖，培養(yǎng)30 d后，調(diào)查原球莖誘導(dǎo)率。
1．3植物激素對(duì)原球莖增殖及幼苗分化的影響
將誘導(dǎo)的原球莖分別接種于下列不同培養(yǎng)基中：① MS+6-BA 1．0+NAA 0．1；②MS+6-BA 1．0+NAA0．5；③MS+6-BA 1．5+NAA 0．1；④MS+6-BA l．5+NAA 0．5；⑤MS+6-BA 2．0+NAA 0．1；⑥MS+6-BA2．0+NAA 0．5，以上培養(yǎng)基均加入香蕉汁130 g／L，活性炭1.0 g／L。每瓶接種10個(gè)原球莖，每處理10瓶，培養(yǎng)40 d后，調(diào)查增殖系數(shù)及成苗數(shù)。
1．4植物激素對(duì)幼苗生根的影響
將原球莖增殖及幼苗分化培養(yǎng)中高于2 cm的幼苗切出，轉(zhuǎn)接到下列生根壯苗培養(yǎng)中：①1／2 MS+6-BA0．1+NAA 0．5；②1／2 MS+6-BA 0．3+NAA 0．5；③1／2 MS+6-BA 0．5+NAA 0．5；④1／2 MS+6-BA 1．0+NAA0．5，每種培養(yǎng)基均附加香蕉汁150 g／L，活性炭1．5 g／L。每瓶接20個(gè)幼苗，每處理10瓶，30 d后統(tǒng)計(jì)生根率及生長情況。以上MS培養(yǎng)基中白糖濃度為30g／L，1／2 MS培養(yǎng)中的白糖濃度為20 g／L，瓊脂為7g／L，pH值為5．3。培養(yǎng)條件：溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度為1 000～1 800 lx，光照時(shí)間12～14 h／d。
2結(jié)果與分析
2．1植物激素配比對(duì)原球莖誘導(dǎo)的影響
從表l可以看出，隨著6-BA濃度的增大，原球莖誘導(dǎo)率逐步增高，在6-BA 1．5時(shí)達(dá)到最大，6-BA濃度再增大，原球莖誘導(dǎo)率下降，生長中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分裂素低濃度形成原球莖慢，并且誘導(dǎo)出原球莖數(shù)目少，高濃度形成愈傷多，原球莖少。在培養(yǎng)基MS+6-BA 1．5 mg／L+ NAA0．2 mg／L+香蕉汁100 g／L+活性炭0．5g／L原球莖誘導(dǎo)率達(dá)到90％，并且每個(gè)莖尖分化出4～5個(gè)原球莖。
表1 植物激素配比對(duì)原球莖誘導(dǎo)的影響
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6-BA/mg·L-1 |
NAA/mg·L-1 |
誘導(dǎo)率/％ |
原球莖分化情況 |
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0.5 |
0.2 |
10 |
莖尖很少分化 |
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1.0 |
0.2 |
40 |
莖尖形成２～３原球莖 |
|
1.5 |
0.2 |
80 |
每個(gè)分化４～５個(gè)原球莖 |
|
2.0 |
0.2 |
20 |
第個(gè)分化１～２原球莖 |
2．2植物激素對(duì)原球莖增殖及幼苗分化的影響
大花蕙蘭原球莖在增殖的過程中有幼苗的分化，長時(shí)間不轉(zhuǎn)接，會(huì)形成很多苗，因此增殖與幼苗分化同時(shí)進(jìn)行。合理的激素配比會(huì)達(dá)到理想增殖與成苗。從表2可以看出，隨著細(xì)胞分裂素的增大，原球莖增殖系數(shù)也增大，但幼苗分化數(shù)卻隨著降低，綜合考慮增殖與成苗，培養(yǎng)基④最好，因此最佳增殖及幼苗分化培養(yǎng)基是 MS+6-BA 1．5 mg／L+NAA 0．5 mg／L+香蕉汁130 g／L+活性炭1．0 g／L。
表2 不同激素配比對(duì)原球莖增殖及幼苗分化的影響
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培養(yǎng)基編號(hào) |
接種總數(shù)/個(gè) |
原球莖總數(shù)/個(gè) |
增殖系數(shù) |
分化苗數(shù)/個(gè) |
|
① |
100 |
420 |
4．2 |
110 |
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② |
100 |
610 |
6．1 |
130 |
|
③ |
100 |
1080 |
10．8 |
210 |
|
④ |
100 |
1150 |
11．5 |
480 |
|
⑤ |
100 |
1100 |
11．0 |
120 |
|
⑥ |
100 |
1230 |
12．3 |
160 |
2．3植物激素對(duì)幼苗生根的影響
幼苗接在4種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根，隨著細(xì)胞分裂素濃度的增大，生根率逐漸降低，說明細(xì)胞分裂素對(duì)生根有一定的促進(jìn)作用，但濃度加大引起增殖影響生根，培養(yǎng)基①生根率高，生根條數(shù)多，苗長得好。故生根壯苗最佳培養(yǎng)基是1／2 MS+6-BA 0．1 mg／L+ NAA0．5 mg／L+香蕉汁150 g／L+活性炭1.5 g／L。
表3 植物激素對(duì)幼苗生根的影響
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培養(yǎng)基編號(hào) |
接種株數(shù)/株 |
生根株數(shù)/株 |
生根率/％ |
平均根長/cm |
苗長勢 |
|
① |
200 |
198 |
99 |
>4 |
苗高,長勢均等,較綠 |
|
② |
200 |
150 |
75 |
2～3 |
中等高度,較綠 |
|
③ |
200 |
120 |
60 |
1～2 |
生長緩慢,淺綠 |
|
④ |
200 |
60 |
30 |
<1.5 |
生長極滿慢,淺綠 |
3小結(jié)與討論
植物激素中的細(xì)胞分裂素6-BA和生長素NAA對(duì)大花蕙蘭FN4組織培養(yǎng)快速繁殖影響很大。原球莖最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-BA 1．5 mg／L+NAA0．2 mg／L+香蕉汁100 g／L+白糖30 g／L+活性炭0．5g／L+瓊脂7．0 g／L，原球莖誘導(dǎo)系數(shù)可達(dá)到4～5。 原球莖增殖及幼苗分化培養(yǎng)基是MS+6-BA1．5 mg／L+NAA 0．5 mg／L+香蕉汁130 g／L+活性炭1．0 g／L+白糖30 g／L十瓊脂7．0 g／L，探索最佳增殖與幼苗分化培養(yǎng)基中激素配比對(duì)大花蕙蘭FN4工廠化育苗有很大意義。生根壯苗培養(yǎng)基1／2 MS+6-BA0．1 mg／L+NAA 0．5 mg／L+香蕉汁150 g／L+活性炭1．5g／L+白糖20g／L+瓊脂7．0 g／L。 （田志強(qiáng) 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)科技處）
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